1. 包被过程(注意设置空白对照，阴性对照)：
elisa试剂盒检测步骤将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg)，每孔抗原加入100μl， 置37℃，4h，或4℃，24h；弃去孔中液体。(为避免蒸发，板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)
2. 封闭酶标反应孔：
5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔，并去除各孔中的气泡，封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍，每遍3min。
洗涤方法：吸干孔内反应液，将洗涤液注满板孔，放置2min略作摇动，吸干孔内液，倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤次数3次
3. 加入待检测样品(建立合适的浓度梯度)：
检测时一般采用1：50-1：400的稀释度， 应采用较大稀释体积进行，一般保证样品吸取量>20μl。
将稀释好的样品加入酶标反应孔中，每样品至少加双孔， 每孔100μl，置于37℃，40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍，每遍3min。
4. 加入酶标抗体：
酶标抗体： 根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行. 37℃，30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前。
5. 加入底物液(现用现配)：
shou选TMB-过氧化氢尿素溶液，OPD-过氧化氢底物液系统次之。
底物加入量：每孔100μl，置37℃避光放置3-5分钟，加入终止液显色。
6. 终止反应：
每孔加入终止液50μl终止反应，于20min内测定实验结果。
7. 结果判断：
OPD显色后采用492nm波长，TMB反应产物检测需要450nm波长.检测时一定要首先进行空白孔系统调零。用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示，当P/N大于2时作为抗体的效价.(数值的大小依具体检测要求而定.)elisa试剂盒检测步骤
