钠钾泵(Na/K pump;Na/K ATPase)功能红色荧光检测试剂盒产品说明书
(中文版)
主要用途
钠钾泵(Na/K pump;Na/K ATPase)功能红色荧光检测试剂是一种旨在通过电变色苯乙烯荧光探针,应对膜性囊泡产生电位梯度变化,而产生荧光变化,来分析和观察钠钾离子转运功能,进一步评价P型ATP酶中的Na+-K+ ATP酶功能的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体等细胞钠钾离子转运活性,即P型ATP酶的Na+-K+ ATP酶功能的检测,以及抑制剂筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景
细胞膜上的膜整合蛋白(integral membrane protein)参与细胞内外的物质传输、能量产生与转化等生物学过程,构成离子或代谢分子的通道,常见的包括氢离子、钠离子、钾离子等电解质,在能量依赖型或非依赖型的条件下,完成生理代谢的物质交换。膜通道转运功能检测(transport或uptake assay)用于分析转运蛋白(transport protein)和底物(substrate)的功能、筛选通道抑制剂、进而发现药物以及抗药性机制。建立分子构建的载体或宿主模型、分离膜性囊泡(membrane vesicle)包括正常外向膜性囊泡(Right-side out;RSOV)或内侧外翻膜性囊泡(In-side out;IOV),通过标记底物的转运,来定量测定转运活性。钠/钾ATP酶(Na+/K+-ATPase;EC3.6.1.3),是五类ATP酶(F、V、A、P和E型)中P型ATP酶(P type ATPase)之一。ATP酶催化三磷酸腺苷分解为二磷酸腺苷和无机磷。这一去磷酸化反应释放出能量,成为细胞生命代谢的能源。ATP酶为跨膜蛋白(transmembrane),帮助传输各种代谢分子进出细胞。P型ATP酶,又称为E1-E2 ATP酶,通常由一条或两条多肽构成,且呈现两种主要的结构构象E1和E2。这类ATP酶存在于细菌和真核细胞膜和细胞器上,其功能在于水解ATP获得能量,跨膜运输各种化学分子(post albers cycle)。P型ATP酶可以分成4种,Ca2+传输性、Na+-K+ /H+-K+传输性、H+传输性和所有细菌型等。其中钠/钾ATP酶,又称为钠钾泵或钠泵(Na+-K+ pump),是一种电致(electrogenic)膜蛋白。细胞排(3分子)钠吸(2分子)钾时,细胞膜两边无电荷流动,并建立细胞内外离子(胞内低钠、胞外高钾)浓度平衡,维持细胞静态膜电位(电化学电位梯度),控制细胞容量,调节pH,调节神经和肌肉兴奋性,以及碳水化合物、氨基酸和维生素的摄入等。钠/钾ATP酶是心脏病的重要药物靶标。通过使用电变色苯乙烯荧光探针RH421,为膜电压敏感性两性离子染料,在钠/钾ATP酶和ATP的存在下,产生电化学电位梯度,使红色荧光发生升高或降低的变化(激发波长580nm,散发波长670nm),以分析转运蛋白P型ATP酶中Na+/K+ ATP酶的功能,以及其抑制剂的筛选。
产品内容
缓冲液(Reagent A) 毫升
染色液(Reagent B) 微升
反应液(Reagent C) 毫升
补充液(Reagent D) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,避免光照;有效保证6月
用户自备
恒温水槽或培养箱:用于反应孵育
500微升比色皿:用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪:用于荧光定量分析
实验步骤
一、 样品准备
1. 确定测定对象:动物/人体细胞
2. 分离膜性囊泡(注意:建议使用 系列分离试剂盒产品)
3. 准备好待测的分离样品,并测定钠/钾ATP酶活性
4. 置于冰槽里备用