细菌呼吸链复合物II活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
细菌呼吸链复合物II(琥珀酸-辅酶Q还原酶)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚,通过反应系统测定样品中二氯酚靛酚还原后吸光峰值的变化,即采用比色法测定样品中酶活性的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种野生、培养或病原性细菌膜蛋白悬液样品的琥珀酸-辅酶Q还原酶的特异性活性检测。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。
技术背景
细菌呼吸链复合物II,通常称为琥珀酸-辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶(Succinate-Coenzyme Q Oxidoreductase;Succinate Dehydrogenase;SQR),结构和功能上类同于线粒体复合物II,膜结合型,是细菌需氧呼吸链与三羧酸循环链接的主要元素:含有四个亚体,铁硫中心(Fe-S clusters),辅因子为黄素(flavin)。其最特征性的酶活性是噻吩甲酰三氟丙酮(thenoyltrifluoroacetone;TTFA)敏感的琥珀酸-辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸(succinate)被氧化为富马酸(fumarate),细菌内电子由供体黄素传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;ubiquinone)的能量转移反应,进行呼吸链传递。基于琥珀酸底物,通过琥珀酸-辅酶Q还原酶的催化,氧化为富马酸,同时氧化型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIP)转化为还原型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIPH2),在分光光度仪下产生吸光峰值的变化(600nm 波长),由此定量测定琥珀酸-辅酶Q还原酶的特异活性。其反应系统是:
产品内容
缓冲液(Reagent A) 毫升
反应液(Reagent B) 毫升
阴性液(Reagent C) 毫升
底物液(Reagent D) 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融; 反应液(Reagent B)和 底物液(Reagent D),避免光照,有效保证6月
用户自备
比色皿:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
培养箱:用于孵育反应物
实验步骤
实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化; 缓冲液(Reagent A)室温预热; 反应液(Reagent B)和 底物液(Reagent D)注意避光。然后进行下列操作。
一、 测定准备
1. 准备好待测样品(例如细菌膜蛋白样品等),置于冰槽里
2. 设定好分光光度仪(温度为30℃):波长为600nm,间隔60秒,读数6次(共5分钟),并置零