细胞钾离子(potassium ion)浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
细胞钾离子(potassium ion)浓度荧光定量检测试剂盒是一种旨在通过钾离子敏感性荧光探针PBFI,与钾离子结合后,其荧光强度显著增强,在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化,来测定样品中总钾离子浓度的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体细胞裂解悬液样品中总钾离子的浓度检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,检测敏感。
技术背景
钾离子(potassium ion;K)是人体中的一种重要电介质和矿物质,尤其是细胞内和细胞外基质中的重要阳离子。其功能在于维持细胞内外的酸碱平衡、渗透压、膜电位、神经肌肉功能等。血钾增高,即高血钾症(hyperkalemia)与肾衰、脱水性休克、肾上腺皮质功能不全有关;而血钾降低,即低钾血症(hypokalemia)与营养不良、负氮平衡、胃肠道液体流失等有关。正常人体的血钾浓度范围狭窄,在3至6毫摩尔。钾的检测包括化学沉淀法、离子选择性电位分析法(ion selective potentiometry;ISP)、火焰光度法(flame photometry)、原子吸收分光光度法等技术,但容易受到其它金属元素的干扰,或者受限于仪器的特殊的要求。钾结合性苯并呋喃间苯二甲酸(potassium binding benzofuran isophthalate;PBFI),是苯并呋喃间苯二甲酸衍生物,其荧光基团与重氮冠醚(diazocrown ether)的氮分子链接,产生相应配体的选择性,一旦与钾离子结合,其荧光强度迅速增强,可以敏感测定游离钾离子水平。在荧光分光光度仪下,激发波长340至380nm,散发波长450至550nm,来定量测定的钾离子浓度。
产品内容
清理液(Reagent A) 毫升
裂解液(Reagent B) 毫升
反应液(Reagent C) 毫升
饱和液(Reagent D) 毫升
阴性液(Reagent E) 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里; 反应液(Reagent C)避免光照;有效保证6月
用户自备
15毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
细胞刮脱棒:用于贴壁细胞脱离
微型台式离心机:用于样品制备
黑色96孔板:用于样品荧光测定的容器
荧光酶标仪:用于样品荧光分析
实验步骤
一、 样品准备
1. 准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞(1 X 106细胞)
2. 小心加入xx 清理液(Reagent A),覆盖生长表面
3. 小心抽去清理液
4. 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞(注意:可以使用胰酶消化)
5. 加入xx 清理液(Reagent A),混匀细胞
6. 移入到预冷的15毫升锥形离心管(注意:悬浮细胞从这一步骤开始)
7. 放进4℃台式离心机离心5分钟,速度为300g
8. 小心抽去上清液
9. 加入xx 裂解液(Reagent B),充分混匀
10. 转移到预冷的1.5毫升离心管
11. 强力涡旋震荡15秒
12. 置于冰槽里孵育30分钟
13. 放进4℃微型台式离心机离心10分钟,速度为16000g(或13000RPM,例如eppendorf 5415)
14. 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
15. 移取10微升进行蛋白定量检测(注意:建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒-GMS30030.1)
16. 即刻放进-70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、测定准备
1. 准备好待测样品,例如细胞裂解悬液等,置于冰槽里备用
2. 设定好荧光酶标仪(25℃):激发波长345nm,散发波长510nm
三、荧光测定
1. 准备1个黑色96孔板,标记为:样品孔、空白对照孔、最大对照空
2. 移取100微升(20微克蛋白)样品到样品孔里
3. 移取xx 饱和液(Reagent D)到最大对照空里
4. 移取xx 阴性液(Reagent E)到空白对照空
5. 分别加入xx 反应液(Reagent C)到所有孔里
6. 轻轻摇动黑色96孔板,混匀
7. 室温下(25℃),孵育30分钟,避免光照
8. 即刻放进荧光酶标仪测读:获得相对荧光单位(relative fluorescence unit;RFU)
9. 计算样品钾离子浓度(注意:不要遗忘乘上稀释倍数)
注意事项
1. 本产品为20次操作
2. 操作时,须戴手套
3. 孵育反应完成后即刻进行荧光测定
4. 用户可以选择激发波长340至380nm,散发波长450至550nm的任一波长进行检测
5. 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度
6. 样品浓度可以按照细胞数或蛋白量定义
7. 本公司提供系列钾生化检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定检测敏感